:【淚部資料】蛋白質芯片檢測適用樣品 & 樣品收集方法(修正版)

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樓主 2019-06-17 19:16:34
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(抗體芯片技術原理)


一、適用于蛋白質芯片的常見樣品


血清、血漿、細胞培養上清、細胞裂解液、組織裂解液;除了這些常見的樣品,全世界客戶使用RayBiotech抗體芯片產品檢測成功的特殊樣品還有尿液、眼淚、唾液、痰、腦脊液、前列腺液、腹腔注射液、奶水、初乳、支氣管肺泡灌洗液、膿腫液、中耳液、血小板釋放物、骨頭裂解液等。

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組織裂解液一般比較容易造成芯片的背景較高,目前有客戶使用RayBiotech抗體芯片發表文獻測試過的組織裂解液有肺組織、支氣管、子宮內膜組織,肝臟組織,宮頸腫瘤、脾、腦組織、宮頸組織、囊腫組織等,這些組織裂解液做出芯片結果的背景一般都在可以接受的范圍內,但是不能排除一些非常罕見的組織裂解液對芯片信號背景影響較大。




二、樣品收集方法


1
血清


收集全血至普通離心管或者采血管(BD vacutainer公司的紅頭真空采血管,不含抗凝劑、防腐劑或者分離劑),4°C放置30-45min,以3000-5000rpm/min離心10min,取上清檢測或者凍存(-20或-80°C)。


2
血槳


收集全血至BD vacutainer公司的EDTAK2、肝素鋰、或者枸櫞酸鈉等真空采血管,以3000-5000rpm/min離心10min,取上清檢測或者凍存(-20或-80°C)。


3
尿液


收集不添加穩定劑的尿液樣本,高速離心樣本(如:10000rpm離心5min或5000rpm離心10min),取上清分裝,利用干冰或甲醇浴使樣本迅速結凍,儲存于-80°C備用。


4
細胞上清(條件培養基)


血清中含有部分細胞因子,所以最好制備無血清或低血清條件培養基。在第0天,于100mm培養皿中加入完全培養基,然后接種1ⅹ106個細胞,培養第3天,倒掉培養基,加入6-8ml低血清培養基(如含有0.2%牛血清的培養基);第5天,收集低血清的培養基于15ml離心管中,2000rpm、4°C離心10min,收集上清,分裝于1.5ml EP管中,儲存于-80°C中,可以保存1年以上。不同細胞可根據生長狀況確定培養時間。


Tips:細胞上清歸一化方法


對于細胞上清的檢測,接種同樣數量的細胞、加入同樣體積培養基進行培養刺激,如果細胞生長未受到影響,收集上清時細胞數目不變,細胞上清可稀釋同樣的倍數來檢測;如果細胞數目有變化,樣品之間歸一化方法建議有兩種:


收集細胞上清后,對細胞進行計數,根據計數的結果來調整細胞上清的上樣比值,使不同樣品根據細胞數量歸一化后上樣檢測,芯片檢測所得的細胞因子信號結果可進行對比;


收集細胞上清后,可將細胞裂解,然后蛋白濃度定量,根據得到的蛋白濃度來調整細胞上清的上樣比值,使不同樣品根據細胞裂解后蛋白濃度來歸一化后上樣檢測,芯片檢測所得的細胞因子信號結果可進行對比。


5
細胞裂解液


細胞長滿培養皿(d=10cm)時,(數量約為106-108)將上清吸掉,用PBS(4°C)清洗2次細胞,加入200-500μl細胞裂解液,(或者參照您購買的裂解液說明書),快速將細胞從培養板刮下,收集細胞裂解液,加入微量離心管中,使用渦旋振蕩器振蕩混合30min。14000rpm、4°C離心混合液15-20min,將清澈上清轉入干凈的離心管中(確保只吸取上層清澈細胞裂解液上清,如果上清出現絮狀或者渾濁,將細胞裂解液上清轉入干凈的離心管中,于14000rpm、4°C再次離心15-20min后取上清)。建議裂解蛋白濃度至少2mg/ml,上樣時稀釋倍數約5-10倍。


6
組織裂解液


將組織切成小塊,轉移至2ml離心管,建議10mg組織加入500μl裂解液(或者參照您購買的裂解液說明書),冰上靜置15-25min,使用均質機將組織打碎,14000rpm、4°C離心混合液15-20min,將清澈上清轉入干凈的離心管中(確保只吸取頂層清澈細胞上清,如果上清出現絮狀或者渾濁,將細胞上清轉入干凈的離心管中,14000rpm、4°C再次離心15-20min后取上清)。



RayBiotech作為國際領先的蛋白芯片和免疫產品專業供應商,擁有世界上種類最多的抗體芯片及ELISA及產品,其產品檢測靈敏度高,種屬多樣,包括涵蓋人、小鼠、大鼠、豬、馬、牛、猴、犬、貓、兔等多個種屬。使用RayBio公司產品發表的文獻達到數千篇。


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